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【公告】高通量基因测序技术用于胚胎植入前遗

时间:2019-04-25 11:53来源:未知 作者:代孕包成功 点击:
【公告】高通量基因测序技术用于胚胎植入前遗传学筛查/诊断近年来新技术新方法日新月异,为了更好的满足胚胎植入前遗传学筛查/诊断(PGS/PGD)的要求,西北妇女儿童医院生殖中心

【公告】高通量基因测序技术用于胚胎植入前遗传学筛查/诊断

近年来新技术新方法日新月异,为了更好的满足胚胎植入前遗传学筛查/诊断(PGS/PGD)的要求,西北妇女儿童医院生殖中心

的PGS/PGD将采用高通量基因测序技术(即二代测序,NGS),替代原有的微阵列比较基因组杂交技术(m icro-array CGH)。

多次退火环状循环扩增技术 (MALBAC),替换原有的简并寡核苷酸引物PCR(DOP-PCR)技术。

单细胞扩增技术采用多次退火环状循环扩增技术

常用的常用的 PGS/PGD检测方法的介绍:

PCR法是胚胎植入前遗传诊断最先使用的方法,可检测特定基因的点突变以及基因片段缺失/插入,诊断各类单基因疾病,是

PCR 在 PGD中最为重要的应用。但是PCR不能检测染色体大片段的缺失和重复,并且存在通量低、成本高的缺点,所以在临床

荧光原位杂交(fluorescence in s itu hybridization,FISH)技术是传统的PGS遗传学分析技术,可对52018年北京代怀孕价格~14对染色体进行非整倍体

筛查,每枚探针精确率92%~99%。但是由于FISH不能对全部染色体进行检测,所以不能全面反映胚胎的情况,而且步骤繁琐,

技术要求较高,所以在PGS/PGD中的应用越来越少。

微阵列(m icroarrays)技术是近年来发展起来的更加准确、快速检测全部染色体的情况。目前主要的技术平台有微阵列比较基

因组杂交(array com-par-a-tive genom ic hybridization,array CGH)技术和单核苷酸多态性微阵列(s ingle nuc leotide

polymorphism-based array,SNP array)技术。微阵列(m icroarrays)技术一次可检测全部染色体,且分辨率和准确率比FISH

高。但array CGH不能进行单基因病PGD,不能区分单倍体和多倍体,也不能可用于单亲源性二倍体。

第二代测序(next generation se-quen-c ing,NGS)技术是近几年发展起来的新一代DNA测序技术,具有通量高、速度快、成本

较低等优点,同时进行单基因病诊断和全面染色体筛查,所以NGS技术在PGS/PGD中的应用越来越多。与微阵列技术相

比,NGS技术具有快速,低成本,灵敏度更高,嵌合检出率高,可以更精确的检测胚胎染色体和基因异常。随着临床的应

用,NGS技术用于PGS/PGD的临床结局优势也凸显出来,相比微阵列比较基因组杂交技术,高通量基因测序技术可以获得更高

的种植率、妊娠率及活产率[1][2]。

简并寡核苷酸引物PCR(DOP-PCR)是一种基于PCR技术的全扩增方法。由于引物与模板间结合的不确定性以及引物间的相互

作用可能导致较低的全扩增灵敏度及较高的错误率。因此,较大程度上限制了该方法的2018北京代怀孕价格表应用。

多重置换扩增反应(MDA)是使用一条硫代修饰的六核苷酸随机引物(N6)在恒温条件下与基因组随机退火,并在具有强链置

换活性的phi29DNA聚合酶的作用下发生链置换扩增反应。由于MDA是恒温扩增,所以存在一定的非特异性扩增问题,并且扩增

均匀性较差,等位基因脱扣率较高。

多次退火环状循环扩增技术 (MALBAC)是一种新的扩增方法,该方法结合了MDA与PCR方法的特点,扩增子两端互补形成环状

结构,可以很大程度上保证该循环发生的是线性扩增。在经过线性扩增循环后可得到大量全扩增子并做为指数扩增反应的模板,

并使用该27nt通用引物进行指数PCR反应,从而实现对整个基因组的高效而又均衡的全扩增。MALBAC法在扩增覆盖度、均一性

及灵敏度方面有很大提高,是目前单细胞扩增领域的最先进技术。

【1】Friedenthal J, Maxwell SM, Munné S, Kramer Y, McCulloh DH, McCaffrey C, Grifo JA. Next generation sequenc ing for

preimplantation genetic screening improves pregnancy outcomes compared with array comparative genom ic hybridization in s ingle

thawed euploid embryo trans fer cyc les . Fertil Steril. Apr;109(4):627-632.

【2】Lai HH, Chuang TH, Wong LK, Lee MJ, Hs ieh CL, Wang HL, Chen SU. Identification of mosaic and segmental aneuploidies by

next-generation sequenc ing in preimplantation genetic screening can improve c linical outcomes compared to array-comparative

genom ic hybridization. Mol Cytogenet. Apr 26;10:14.

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